1434章 摸着石头过河 (第2/2页)
　　
　　“如果失败呢？“曼因斯坦问。
　　
　　杨平沉默了几秒钟，然后说：“那就用备选方案，鞘内注射巴氯芬，一种GABA_B受体激动剂。效果不如光遗传学精准，但可以全身性增强抑制性调控。副作用是肌张力降低，可能影响运动恢复。“
　　
　　“所以光遗传学是A方案，巴氯芬是B方案，“韦伯总结，“我同意这个计划。但有一个条件，体外验证必须由我亲自来做，光遗传学是我的老本行，我在海德堡的时候做过类似的实验。“
　　
　　“好，“杨平点头，“韦伯教授负责体外验证，伊娃负责闭环传感器升级，莉娜负责数据分析模型，汉斯负责病毒载体和光纤制备。唐顺，你协调所有资源，确保一周内出结果。“
　　
　　“明白！“
　　
　　体外验证开始。
　　
　　韦伯亲自主刀，从M7的脊髓损伤区取了一小块组织，大约两立方毫米，放在冰冷的人工脑脊液中，切成了三百微米厚的薄片。这些薄片被转移到培养皿中，保持存活状态，可以持续记录电生理活动四到六个小时。
　　
　　病毒载体是AAV9-hSyn-NpHR-EYFP，一种经过改造的腺相关病毒。AAV9对神经元有高度的嗜性，hSyn启动子确保NpHR只在神经元中表达，EYFP作为荧光标记，方便在显微镜下观察转染效率。
　　
　　韦伯把病毒溶液滴在脊髓切片上，孵育两个小时。然后用PBS冲洗三遍，放在共聚焦显微镜下观察。
　　
　　“转染效率，“他调整着焦距，“大约百分之三十五。“
　　
　　“百分之三十五，“曼因斯坦在旁边记录，“够吗？“
　　
　　“理论上，脊髓背角的抑制性中间神经元占总神经元数量的百分之二十到三十。百分之三十五的转染效率，意味着大部分抑制性神经元都能被靶向，足够了。“
　　
　　下一步是电生理验证，韦伯把一片转染过的脊髓切片放到电生理记录槽中，用玻璃微电极记录背角神经元的自发放电。同时，他在切片的上方放置了一根直径两百微米的光纤，连接到一台黄色激光器上。
　　
　　“基线放电频率，“他看着示波器，“每秒五赫兹，正常范围。“
　　
　　然后他打开了激光器。一束微弱的黄光透过光纤，照射在脊髓切片的表面。
　　
　　“光强，一毫瓦每平方毫米，波长，五百九十纳米。“
　　
　　示波器上的波形变了，自发放电频率从每秒五赫兹降到了每秒一赫兹，降幅百分之八十。
　　
　　“抑制效果确认，“韦伯的声音很平静，但曼因斯坦注意到他的手微微颤抖，“NpHR被激活后，氯离子内流，神经元超极化，放电减少。“
　　
　　“可逆吗？“杨平问。
　　
　　韦伯关掉激光器，十秒钟后，放电频率恢复到每秒四点八赫兹。
　　
　　“完全可逆。“
　　
　　会议室里爆发出一阵压抑的欢呼。唐顺和汉斯击了一下掌，莉娜在笔记本上飞快地敲着字，伊娃难得地露出了一丝微笑。
　　
　　但韦伯没有笑，他盯着那片脊髓切片，看了很久，然后说：“这只是体外，体内的环境复杂得多，炎症、免疫反应、胶质瘢痕、血流变化。体外成功，不代表体内能成功。“
　　
　　“我知道，“杨平说，“但我们至少证明了，这个方向是对的，科研就是摸着石头过河。“
　　
　　“摸着石头过河？”
　　
　　韦伯捉摸着这句话，他赞叹：
　　
　　“这是富有哲理的一句话。”
　　
　　紧接着，体内实验也开始进行。
　　
　　这一次，手术的规模比前两次都大。杨平主刀，曼因斯坦协助，伊娃负责电生理监测，汉斯负责病毒注射和光纤植入，韦伯在台下观摩。
　　
　　手术的第一步，是病毒注射。汉斯用一根玻璃微注射针，把五微升AAV9-hSyn-NpHR-EYFP溶液缓慢地注入M7的脊髓背角，双侧，每个注射点一微升，共十个注射点。注射的速度极慢，每分钟零点一微升，以避免压力损伤。
　　
　　“病毒注射完成，“汉斯汇报，“等待十五分钟，让病毒扩散。“
　　
　　十五分钟后，第二步，光纤植入。伊娃设计了一套微型光纤阵列，四根光纤，直径各两百微米，排列成一个菱形，覆盖脊髓背角的主要区域。光纤的末端连接到一个皮下植入的LED模块上，模块由无线充电供电，可以通过外部控制器调节光强和频率。
　　
　　“光纤植入完成，“杨平说，“闭合切口。“
　　
　　手术持续了一个多小时。当M7从麻醉中醒来时，它的后肢肌力没有变化，病毒和光纤本身不会影响运动功能。但所有人都知道，真正的考验还没有开始。
　　
　　NpHR的表达需要时间。病毒进入神经元后，需要三到五天才能表达出足够的蛋白。所以术后第五周的前半周，是等待期。
　　
　　等待的日子里，研究所的气氛紧张得像一根绷紧的弦。每天早上，伊娃都会给M7做电生理监测，记录脊髓背角的自发放电频率。前三天，数据没有明显变化，NpHR还没有表达足够。
　　
　　第四天，变化出现了。
　　
　　M7的背角自发放电频率从正常的每秒三到五赫兹，突然升到了每秒十二赫兹。这是一个危险的信号，异常高频放电，意味着中枢敏化正在形成。
　　
　　“启动光刺激，“韦伯说。
　　
　　伊娃按下了控制器的按钮，黄色的光通过光纤，照进M7的脊髓背角。
　　
　　十秒钟后，放电频率降到了每秒六赫兹。二十秒后，降到了每秒四赫兹。一分钟后，稳定在每秒三点五赫兹，比基线还低，说明抑制效果良好。
　　
　　“有效，“韦伯的声音传来，带着一丝颤抖，“光遗传学闭环调控，有效。“
　　
　　杨平长长地出了一口气，他看着控制器上那个小小的黄色指示灯，觉得那是我见过的最美的光。
　　
　　其实科研就是这样，摸着石头过河，谁也不知道结果怎么样，只能边走边调整，慢慢地就走通一条路。如果没有大胆的开始，无论如何也不会有正确的路。